Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型心血管疾病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失胰脏自身病原躯到消失1改进型癌症临床副作用的困难重重率在孩童时代就有不太好的叙述，多个胰脏自身病原躯感染性的孩童中都有70%在血浆转换后10将近中都风癌症，而随访15年的孩童这一%上升到84%。相较之下，占总临床1改进型癌症一半以上的改进型1改进型癌症的中风机制还不会想得到必要的研究工作。

愈来愈多的人开始用到分期系统来表述1改进型癌症的困难重重：个躯在消失多种胰脏自身病原躯时进到第1之前，消失血糖异常时进到第2之前，消失副作用时进到第3之前。一些多发胰脏自身病原躯感染性的个躯，在1期和2期，困难重重很较慢，并蓬勃发展为中风的1改进型癌症。我们前叙述了一分组在首次测定到多种胰脏自身病原躯检验后据估计10年无癌症的很较慢困难重重者，这分组患儿人数少，但特征极为明确。随后，我们推断出胰脏自身抗原特异性CD8+T细胞连锁反应质子化在困难重重加速的患儿中都基本不存有，但在未来会中风和长期存有的癌症患儿中都很较难测定到。这不太可能表明，与困难重重患儿相较，这些患儿诱发质子化的调节减较慢。

一时代研究工作表明，尽管调节性T细胞连锁反应(Treg)存量正常，但癌症患儿存有一些功能缺失，其中都还包括对IL-2的质子化能力减少。此外，癌症患儿中都的现象CD4+T细胞连锁反应不太可能对调节更具抵抗性，平庸为现象T细胞连锁反应的诱发西移动，自然归因于的Treg和躯外归因于的抑止Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞连锁反应中都IL-2质子化西移动。本研究工作的目的是叙述了CD4+调节性T细胞连锁反应(Treg)在一小群极加速困难重重者中都的特征，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群进一步将的纵向研究工作，在21岁以下确诊的患儿亲属中都检查1改进型癌症的危险因素。我们前叙述了长期加速困难重重者的特征，他们维持多重胰脏自身病原躯感染性超过10年，但不会消失癌症的临床副作用，较慢性或非来进行性诱发。随后，10名继续维持无癌症并愿意给予大量血液检验的加速困难重重者纳入T和B细胞连锁反应功能分析。在目前的研究工作中都，8名较慢困难重重者(SP分组)，中都位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的胰脏自身病原躯感染性。所有的参加者都位处1改进型癌症困难重重的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身病原躯对某些抗原的感染性，然而，一名患儿从未位处2期据估计6年，但不会消失临床副作用，一名患儿被诊断为癌症，该人会72岁，在采集实验检验时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中都对该遗传物质来进行了分开分析报告。分开外周血单个连锁反应细胞连锁反应(PBMCs)，采用多值流式细胞连锁反应术和T细胞连锁反应诱发试验分析报告遗传物质中都Treg的增益、表改进型和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、比如说和复出)来进行无全权负责聚类分析，分析报告Treg表改进型。

结果：与卫生遗传物质相较，来自较慢困难重重躯的潜意识CD4+T细胞连锁反应的全权负责聚类推测，酪氨酸的潜意识CD4+ Treg增益上升，与止痛药抑止的TNFR相关复合物(GITR)解读上升有关。一名HbA1c下降的患儿与困难重重加速者和匹配的IgG相较，Treg谱有所完全相同。功能于数，与卫生遗传物质相较，来自加速困难重重躯的Treg介导的CD4+现象T细胞连锁反应诱发明显损害。平庸为对现象CD4+T细胞连锁反应CD25和CD134解读的诱发上升。

由此可知1 深入的表改进型分析推测，CD4+Treg病毒性在较慢困难重重缓冲区中都上升。由FlowSOM转化成的Treg室，分组织起来在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -细胞连锁反应上。根据标明物解读鉴定出10个元簇:潜意识T细胞连锁反应_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞连锁反应;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞连锁反应;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)用到9个完全相同Treg标明转化成的10个元簇的MST。每个路由器代表一个坦克部队(100个坦克部队)，更多的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由器分组周围上色。每个路由器中都的饼由此可知说明单个标明的解读层级。(b)每个元聚类的热由此可知，以推测整躯标明解读。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转化成由此可知，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的表层。(e-l)相比较总质量为每个metacluster装入新线由此可知(总质量> 0.05%)确定为HD和SP分组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞连锁反应(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞连锁反应(l)。浅蓝色左上角代表捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩检查和。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 用到CITRUS的预测模改进型属实，Treg增益的上升是困难重重加速的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP参加者和匹配的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞连锁反应上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的权威性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读来进行分开，模拟FlowSOM族群。(b) HD(环纹)和SP(黑纹)分组以及遗传物质SP 606(浅蓝色)中都CD25+ cd127的增益摘要由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控空集的装入新线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读气压着色，标记突出的簇被识别系统为SP和HD缓冲区中间的完全相同。(j)装入新线由此可知推测了在SP(黑纹)和HD(灰点)分组中都，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相比较总质量(%)。(k)直方由此可知推测每个簇的表改进型(粉红色)和Treg标明相比较解读与取材解读(蓝色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。取材与所有其他簇中都标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩检查和

由此可知3 与卫生献血者相较，困难重重加速者潜意识treg的GITR上升。每个潜意识CD4+T细胞连锁反应元簇(潜意识T细胞连锁反应_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞连锁反应;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞连锁反应;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个解读标明的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的解读热由此可知(sp606不还包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR解读串联，推测直方由此可知(c)和摘要由此可知(d)。Wilcoxon类推符号秩和检查和，p< 0.07(浅蓝色)所有遗传物质还包括，p< 0.05(蓝色)遗传物质SP 606和匹配的HD不还包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR解读，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，推测直方由此可知(e)和摘要由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推符号秩检查和

由此可知4 来自加速困难重重的CD4+ treg细胞连锁反应管控现象CD4+T细胞连锁反应的能力减少。SP分组用蓝色的新线和左上角说明，HD分组用黄色的新线和左上角说明，浅蓝色的新线/左上角说明遗传物质sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞连锁反应来进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标明为CFSE, Treg按观察的%高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再生细胞连锁反应，人才3天内来进行流式细胞连锁反应术测定。(a-d)与CD4+反之亦然者相比较应的treg人才(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发总和。用到感染性对照(酪氨酸的叛离细胞连锁反应下同treg)算出诱发总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 现象CD4+T细胞连锁反应对加速困难重重的T细胞连锁反应再生的诱发更引人注目。SP分组用蓝色的新线和左上角说明，HD分组用黄色的新线和左上角说明，浅蓝色的新线/左上角说明遗传物质sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞连锁反应来进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标明，treg按观察的%高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再生细胞连锁反应，人才3天内来进行流式细胞连锁反应术(CD25反染)和细胞连锁反应因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发百分率(b)。(c,d) CD25诱发百分率(c)和CD134诱发百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才中都的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得出结论：我们得出的得出结论是，来自加速困难重重子的再生潜意识CD4+Treg在GITR解读中都想得到了延展和比较丰富，强调了进一步研究工作Treg在1改进型癌症风险个躯中都的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28