Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1DF糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到家兔自身抗体到注意到1标准型冠心病针灸疼痛的令人满意领军在老年人时期就有极佳的阐述，多个家兔自身抗体HIV的老年人中所有70%在血清类比后10将近罹患冠心病，而随访15年的老年人这一%减低到84%。相比较之下，分之二针灸1标准型冠心病一半以上的标准型1标准型冠心病的肺癌机制还没有给予更好的险恶研究。

愈来愈多的人开始常用分收尾系统来定义1标准型冠心病的令人满意：幼体在注意到多种家兔自身抗体时转至第1收尾，注意到摄入量异常时转至第2收尾，注意到疼痛时转至第3收尾。一些多发家兔自身抗体HIV的幼体，在1期和2期，令人满意较比较慢，并发展为肺癌的1标准型冠心病。我们前阐述了一第一组在首次验证到多种家兔自身抗体抽取后至极少10年无冠心病的极比较慢令人满意者，这第一组病患者总数极少，但构造非常清楚。随后，我们推测家兔自身抗体酪氨酸CD8+T蛋白反应会在令人满意快速的病患者中所基本不存在，但在近期肺癌和一直存在的冠心病病患者中所很容易验证到。这可能会说明，与令人满意病患者相比较，这些病患者神经性反应会的调节增强。

20世纪险恶研究说明，尽管调节性T蛋白(Treg)数目短时间，但冠心病病患者存在一些机能局限性，其中所包括对IL-2的反应会意志力下降。此外，冠心病病患者中所的振荡CD4+T蛋白可能会对调节颇具抵抗性，发挥为振荡T蛋白的抑制作用减弱，自然产生的Treg和体外产生的正向Treg，以及抗体经历的CD4+T蛋白中所IL-2反应会减弱。本险恶研究的目标是阐述了CD4+调节性T蛋白(Treg)在一小群极快速令人满意者中所的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

步骤：BOX险恶研究是一项以人群结合的斜向险恶研究，在21岁以下确诊的病患者亲属中所检查1标准型冠心病的生命危险因素。我们前阐述了一直快速令人满意者的构造，他们保有多重家兔自身抗体HIV超过10年，但没有注意到冠心病的针灸疼痛，比较慢性或非完成性神经性。随后，10名独自保有无冠心病并愿意提供大量肝脏抽取的快速令人满意者划入T和B蛋白机能统计分析。在现今的险恶研究中所，8名比较慢令人满意者(SP第一组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身抗体HIV。所有的旁观者都受制于1标准型冠心病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身抗体对某些抗体的橘红色，然而，一名病患者已经受制于2期至极少6年，但没有注意到针灸疼痛，一名病患者被诊断为冠心病，该受试者72岁，在野外实验抽取时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中所对该NADPH完成了分开评估。分离外周血单个核分裂蛋白(PBMCs)，采用多参数流式蛋白奥义和T蛋白抑制作用实验评估NADPH中所Treg的频领军、性状和机能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和回归)完成无监督聚类统计分析，评估Treg性状。

结果：与身心健康NADPH相比较，来自比较慢令人满意体的无意识CD4+T蛋白的监督聚类看出，激已逝的无意识CD4+ Treg频领军减低，与糖皮质激素正向的TNFR相关蛋白(GITR)隐含减低有关。一名HbA1c急剧下降的病患者与令人满意快速者和也就是说的对照第一组相比较，Treg谱略有有所不同。机能统计分析说明，与身心健康NADPH相比较，来自快速令人满意体的Treg介导的CD4+振荡T蛋白抑制作用明显受损。发挥为对振荡CD4+T蛋白CD25和CD134隐含的抑制作用减低。

布1 险恶的性状统计分析看出，CD4+Treg共通点在比较慢令人满意函数调用中所减低。由FlowSOM生成的Treg房，聚集在来自所有NADPH的已逝CD4+CD45RA -蛋白上。根据记号物隐含断定出10个元簇:无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)常用9个有所不同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个路由表推选一个坦克部队(100个坦克部队)，巨大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由表第一组区域内绘布。每个路由表中所的饼布对此单个记号的隐含级别。(b)每个元聚类的热布，以看出全面性记号隐含。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)生成布，以及FlowSOM辨识的每个元簇的覆盖物。(e-l)比较稀土元素为每个metacluster箱内两条路线布(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP第一组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白(l)。红色红色推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩鉴定。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 常用CITRUS的预测模标准型证实，Treg频领军的减低是令人满意快速的标志。分级除此以外(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP旁观者和也就是说的HD旁观者在CD4+CD45RA−T蛋白上的相似之处。(a)未成熟CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的推选性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR隐含完成分离，仿真FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(杂色)第一组以及NADPHSP 606(红色)中所CD25+ cd127的频领军简介布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外子集的箱内两条路线布;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)油菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度制做，箭头突出的簇被辨识为SP和HD函数调用之间的有所不同。(j)箱内两条路线布看出了在SP(杂色)和HD(灰点)第一组中所，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的比较稀土元素(%)。(k)直方布看出每个簇的性状(粉红色)和Treg记号比较隐含与故事情节隐含(浅蓝色);上列，缓存Treg_3;上头一行，缓存Treg_4。故事情节与所有其他簇中所记号的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩鉴定

布3 与身心健康献血者相比较，令人满意快速者无意识treg的GITR减低。每个无意识CD4+T蛋白元簇(无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个隐含记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的隐含热布(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中所所有HD(黄色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR隐含并联，看出直方布(c)和简介布(d)。Wilcoxon配对小写字母秩和鉴定，p< 0.07(红色)所有NADPH包括，p< 0.05(浅蓝色)NADPHSP 606和也就是说的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR隐含，从分级除此以外，从所有HD(黄色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(红色)并联，看出直方布(e)和简介布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写字母秩鉴定

布4 来自快速令人满意的CD4+ treg蛋白控制振荡CD4+T蛋白的意志力下降。SP第一组用浅蓝色的两条路线和红色对此，HD第一组用金色的两条路线和红色对此，红色的两条路线/红色对此NADPHsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被记号为CFSE, Treg按辨别的%滴定。用抗CD3 /28微珠激已逝蛋白，培植3天后完成流式蛋白奥义验证。(a-d)与CD4+这样的话者比较应的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培植。(a,b,f) CFSE抑制作用(a,e)和CFSE抑制作用比领军(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用比领军。常用HIV对照(激已逝的作出反应会蛋白下同treg)推算抑制作用比领军。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 振荡CD4+T蛋白对快速令人满意的T蛋白激已逝的抑制作用更寻常。SP第一组用浅蓝色的两条路线和红色对此，HD第一组用金色的两条路线和红色对此，红色的两条路线/红色对此NADPHsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel记号，treg按辨别的%滴定。用抗CD3 /28微珠激已逝蛋白，培植3天后完成流式蛋白奥义(CD25反染)和蛋白因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者都由培植。(a,b) CFSE抑制作用(a)和CFSE抑制作用百分领军(b)。(c,d) CD25抑制作用百分领军(c)和CD134抑制作用百分领军(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中所的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们断定的论断是，来自快速令人满意子的激已逝无意识CD4+Treg在GITR隐含中所给予了扩展和丰富，强调了进一步险恶研究Treg在1标准型冠心病后果幼体中所的表征的必要性。

注解出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28